Akademik Veri Yönetim Sistemi
II. Ulusal Mikoloji Günleri, İstanbul, Türkiye, 9 - 11 Eylül 2015, cilt.1, sa.1, ss.1
Punica granatum L. (nar), Punicaceae familyasının Punica cinsine ait çok yıllık bir bitkidir. Zengin besin içeriği nedeniyle şarap üretiminde ve meyve suyu endüstrisinde, antioksidan etkisi nedeniyle de ilaç sanayinde son yıllarda kullanımı artmıştır. Bu nedenle çalışmamızda nar meyvesinden izole edilen non-Saccharomyces maya türlerinin restriksiyon profillerinin belirlenmesi ve restriksiyon enzim analiz programı (REAP) ile de bu türler arasındaki filogenetik ilişkilerin belirlenmesi planlanmıştır. Ayrıca çalışmamız kapsamında polimorfizim gösteren maya türlerinden seçilen maya türlerinin hücre dışı enzim aktiviteleri de belirlenmiştir. Çalışmamızda kullanılan nar örnekleri Çanakkale’nin Gelibolu ilçesinden toplandı. Laboratuvara getirilen örnekler YGCA petrilerine ekimleri yapıldı. Homojenizasyon işlemi ardından izole edilen mayaların genomik DNA izolasyonları yapıldı ve ITS1-5.8S rDNA-ITS2 bölgeleri PCR yöntemiyle çoğaltıldı. PCR ürünleri 5 farklı restriksiyon enzimi kullanılarak kesimleri yapıldı. Restriksiyon kesimi sonucunda elde edilen bant büyüklüklerine göre izole edilen maya türlerinin haplotipleri belirlendi. Haplotipler ve enzim profilleri kullanılarak REAP programıyla nexus dosyaları oluşturuldu. Nexus dosyaları PAUP4.0 (beta version) programında kullanılarak türler arasındaki filogenetik uzaklıklar belirlendi. Polimorfizm gösteren maya örneklerinin hücre dışı enzim aktiviteleri API-ZYM test sistemiyle belirlendi. Çalışmamız sonucunda nar meyvesinden 48 maya suşu izole edildi. İzole edilen maya suşlarına ait ITS1- 5,8S rDNA -ITS2 bölgesinin amplifikasyonu sonrasında bant büyüklüklerine göre nar meyvesinde 4 grup oluşumu belirlendi. RFLP analizleri sonrası ise polimorfizm gösteren 12 farklı grup elde edildi. PCR amplikonlarının sekans analizleri sonucunda maya suşları Metschnikowia pulcherrima, Cryptococcus bestiolae, Aureobasidium pullulans, Candida zeylanoides, Hanseniaspora uvarum ve Kluyveromyces lactis türleri olarak tanımlandı. REAP analizleri ve PAUP4.0 programları kullanılarak nar meyvesinden izole edilen maya türleri için filogenetik ağaç oluşturuldu. Tanımlanan türlerin API-ZYM test sistemiyle yapılan hücre dışı enzim analizleri sonucunda, maya türlerinde alkalin fosfataz, lösin arilamidaz, esteraz (C 4), esteraz lipaz ( C 8), asit fosfataz, naftol-AS-BI-fosfohidrolaz enzim aktiviteleri tespit edildi.