Maternal kandan fetal DNA eldesi ve fetal RhD analizi


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Dahili Tıp Bilimleri, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: ÇİSEM AKURUT

Danışman: Fatma Sılan

Özet:

Rh uyuşmazlığı gebelik sürecinde ortaya çıkan ve annenin Rh (-) fetüsün Rh (+) olması sonucu görülen uyuşmazlığa verilen isimdir. Yeni doğanın hemolitik hastalığı RhD uyuşmazlığına bağlı olarak ortaya çıkan klinik bir tablodur. İzoimmünizasyon sebebiyle anneden geçen antikorlar fetal hemolize sebep olur. Bunun sonucunda fetüste anemi, fetal hidrops ve tedavi edilmemesi durumunda fetal ölüm gerçekleşebilir. Olası bir fetal kanama riskine karşı 28. haftada tüm gebelere anti-D IgG profilaksisi uygulanmaktadır. Rh (-) fetüs taşıyan gebeler gereksiz aşı ürününe maruz kalmaktadır. Yapılan araştırmalar sonucunda Rh (-) gebelerin %40'nın Rh (-) fetüs taşıdıkları saptanmıştır. Bu sebeplerle fetüsün RhD genotipinin belirlenmesi önem taşımaktadır. Günümüzde RhD genotipinin belirlenmesi amacıyla kullanılan spesifik yöntemler invaziv yöntemler olup, %0,5-2 oranında fetal kayıp riski taşımaktadır. İnvaziv olmayan diğer yöntemlerin spesifitesinin invaziv yöntemler kadar olmaması sebebiyle bu alanda yeni noninvaziv yöntemlere gereksinim duyulmaktadır. Çalışmamıza Rh uyuşmazlığı saptanan 12 gebe dahil edilmiştir. Maternal kandan cell free fetal DNA (cff DNA) izolasyonu sonrası, RhD geninin ekzon 7 ve ekzon 10 bölgelerine spesifik primerler ve TaqMan probları aracılığıyla RT-PCR işlemi gerçekleştirildi. Her örnek üç tekrarlı çalışılarak, fetüsün RhD genotipi belirlenmiştir. Buffy coat'dan elde edilen maternal DNA örnekleri ile RhD genotiplemesi yapılması sonucunda bir annenin kan grubunu yanlış bildiği saptanmıştır. Çalışmamıza dahil edilen 12 olgudan 6 olgunun fetal RhD genotipi Rh (+) diğer 6 olgunun fetal RhD genotipi Rh (-) olarak saptanmıştır. Doğum yapan gebelerin bebeklerinin Rh kan grupları serolojik yöntemlerle doğrulanmıştır. Sonuç olarak bu çalışmada laboratuvarımızda maternal kandan cell free fetal DNA elde edilebilmiş ve fetal RhD genotipi girişimsel bir yöntem olmaksızın başarıyla saptanabilmiştir.